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南京市总工会成立于1927年3月，南京市总工会是中国共产党领导下成立的南京第一个地方工会。南京市总工会是中华全国总工会的地方组织，南京市总工会由南京市工会代表大会选举产生，南京市总工会是南京市各级工会组织的领导机关。

1927年3月25日，全市200多个基层工会派代表参加市工人代表大会，正式成立南京市总工会，选举文化震、钟天樾、梁永等25人组成执行委员会。会址设在夫子庙贡院（今江南贡院）明远楼。在中国共产党领导下，南京工会为维护广大职工合法权益、实现民族独立和人民解放、促进南京改革发展作出了不可替代的贡献。2020年9月，南京市总工会第十七次代表大会成功召开，选举产生了南京市总工会第十七届工会委员会。

90多年来，随着南京工人阶级队伍由小到大、由弱变强，南京市总工会由成立之初的200多个基层组织、5万多名会员，发展到今天5.7万多个基层组织、232万多名会员，工会自身规模不断发展壮大。目前，南京市总工会直属区总工会、产业（开发区、公司）工会、市级机关工会联合会35家，市总机关设置14个职能部门：办公室（研究室）、组织部、宣传教育部、权益保障部、劳动和经济工作部、基层工作部、网络工作部、法律工作部、女职工部（市总工会女职工委员会办公室）、财务部、审计处（市总工会经费审查委员会办公室）、资产管理部、机关党委、老干部处。下属南京市工人文化宫、南京市职工技协办公室、南京市职工大学、南京市总工会干部学校、南京市职工宣传教育中心、南京市职工疗养院、南京市职工对外交流中心、南京市职工互助互济会、南京市职工服务中心、南京天丰投资管理有限责任公司、南京天丰企业发展集团中心、南京天丰大酒店等企事业单位。